维生素b9在肠道吸收后，经门静脉进入肝脏，在肝内二氢维生素b9还原酶的作用下，转变为具有活性的四氢维生素b9。后者是体内转移“一碳基团”的载体，是DNA合成的主要因素。经口服给药，在胃肠道几乎完全被吸收，5—20分钟后可出现在血中，1小时后可达最高血药浓度。大部分主要贮存在肝内，体内的维生素b9主要被分解为喋呤和对氨基苯甲酰谷氨酸。血浆半衰期约为40分钟。由胆汁排至肠道中的维生素b9可再被吸收，形成肝肠循环。慢性酒精中毒时，每天从食物中摄取维生素b9的量大受限制，维生素b9的肝肠循环也可能由于酒精对肝实质细胞的毒性作用而发生障碍。但这是很容易纠正的，只要恢复正常饮食，就足以克服酒精的影响。还有在妊娠，哺乳期间，都可导致体内维生素b9需求增多，是维生素b9补充的指征。
维生素C与维生素b9同服，可抑制维生素b9在胃肠中吸收，大量的维生素C会加速维生素b9的排出，所以，摄取维生素C在2g以上的人必须增加维生素b9的量；抗生素类药物可影响微生物法测定血清或红细胞中维生素b9的浓度，出现浓度偏低的现象。正使用苯妥英，或是服用雌激素、磺胺类药物、苯巴比妥、阿司匹林时，应该增加维生素b9的摄取量；大量摄取维生素b9会使服食二苯乙内酰脲的癫痫症患者产生痉挛现象。甲氧喋啶，乙胺嘧啶等对二氢维生素b9还原酶有较强的亲加力，能阻止维生素b9转化为四氢维生素b9，中止维生素b9的治疗作用。
另外，抑制二氢维生素b9还原酶的药物如甲氨喋呤，甲氧苄氨嘧啶和干扰维生素b9吸收的药物如某些抗惊厥药，口服避孕药都能降低维生素b9的血浆浓度，严重时能引起巨幼红细胞性贫血，这是由这两种药物在细胞内代谢有最后的共同通路所造成的。
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