1.准备水
培养基大部分是水，所以水质直接影响培养基的质量。按照Waymouth标准，水的电阻应该是200万欧姆，一般是实验室玻璃蒸馏器制备的
双蒸馏水或三蒸馏水可以满足使用条件。
2.培养基
有两种培养基:天然的和人工的。实验室一般采用RPMI-1640粉末培养基，采用双蒸水或三蒸水配制。用碳酸氢钠将酸碱度调节至7.2-7.4。如果pH值超过7.6或远低于6.8，大多数细胞就不能生长。RPMI-1640不耐高压灭菌，所以使用前需要用0.22μm孔径的无菌膜过滤。
3.血清
小牛血清常用于培养。血清也不能高压灭菌。无菌小牛血清56℃水浴灭活30分钟，4℃冰箱保存备用。制剂中的含量取决于培养细胞的类型和时间，一般为10-15%。由于血清成分复杂，条件难以控制，可以使用无血清培养基。
4.抗生素
为防止培养过程中细菌污染，可在培养基中加入适当的抗生素，一般用量与组织细胞培养相同:卡那霉素100单位/毫升，或双抗体-青霉素100单位/毫升，链霉素100微克/毫升。
5.植物血凝素
非增殖细胞不能制备染色体，如人外周血淋巴细胞，但在体外培养过程中，在PHA的作用下，可以被刺激转化为成淋巴细胞，进入有丝分裂。
确定分裂高峰在培养后44-48小时和68-72小时。
PHA有两个重要成分:粘多糖和蛋白质。粘多糖促进有丝分裂和蛋白质凝集。PHA激活细胞的数量随着其浓度的增加而增加，直到所有免疫活性细胞都
是活化的，但是PHA浓度太高会引起凝集，一般4%浓度比较好。
