一、液体配制
1.胰蛋白酶液(0.25%)
2.称取所需胰蛋白酶2.5g
3.加入无Ca2+、Mg2+液体(D-Hanks液)1000ml
4.磁力搅拌混匀，使其完全溶解
5.过滤、除菌、分装备用
6.D-Hanks液
7.准确称量NaCl 8.00g、KCl 0.40g、Na2HPO4.H2O 0.06g、KH2PO4 0.06g、NaHCO30.35g;
8.依次将各成分溶解于800ml三蒸水中。溶解时必须待一种试剂完全溶解后，再加入 下一种试剂，直至所有试剂溶解后混匀;
9.酚红用5.6%NaHCO3将之溶解;
10.补加水至1000ml混匀;
11.分装盐水瓶内，8磅10～20min高压蒸汽消毒灭菌，4℃冰箱内保存备用。
12.用水配制7.4% NaHCO3溶液，过滤除菌，分装备用;
13.用无菌NaHCO3溶液调节Hanks液pH值7.2～7.4。
14.以去离子水稀释DNA酶Ⅰ至200 u/ml,过滤除菌备用。
15.90%Percoll: (9份Percoll:1份9.0% NaCl)
16.DMEM-H-G:(DMEM培养液、25mM HEPES、25mM葡萄糖)
17.台盼蓝液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4℃冰箱内保存备用，使用时以PBS稀释至0.4%。
二、滋养层细胞分离纯化实验方法
取剖腹产术后的无菌胎盘组织，在无菌条件下剪取蜕膜层与羊膜层之间的绒毛组织，以无菌生理盐水反复洗涤三次，修剪以去掉连接的组织、血管等得到柔软的绒毛，大约30g。将绒毛组织剪碎至1～3mm3，并尽可能去除肉眼可见的小血管及纤维连接成分。
1.胰蛋白酶消化
将绒毛剪碎至2～3mm3左右的小块;
100mL 0.25%胰蛋白酶、15U/ml DNA酶Ⅰ37℃消化30min，每隔5～10min摇动一次;
(吹打)消化产物，(吸取消化液)经100目不锈钢筛网过滤后，滤液加入50ml离心管内(加入10%FCS)，1000rpm/min离心5min，弃上清;
以含20%胎牛血清DMEM培养液重悬沉淀;(37℃孵箱中)
2.未消化组织重复消化两次;
收集三次细胞悬液，调整细胞浓度至1×106/ml(不必非常严格，只要不是过少)，镜下检查细胞呈单个细胞分布。
此时可接种至培养瓶中培养，如果有细胞成活继续以下实验，便于分析原因。
3.Percoll等密度梯度沉降法分离得到纯滋养层细胞
制备密度梯度 用9.0%NaCl与Percoll以1：9混合，以达到生理性渗透压，再以0.9%NaCl稀释为45%和35%两个浓度，按浓度从大到小将两个不同密度的Percoll溶液逐层缓慢加入10ml离心管内，每个浓度3ml。
加样 用吸管吸取3ml细胞悬液(含4×107个细胞-----不必非常严格)，小心加在10ml离心管顶层的分离介质上面。
分离 室温下以2500r/min离心20min
离心后分为3部分 底层为RBC、少量多形核WBC，顶层为组织连接成分、小血管、绒毛碎片，中层为相对一致的单个核细胞
收集 用吸管吸取云雾状的中层置于一50ml离心管内，DMEM稀释4倍，1000rpm/min离心10min，弃上清，以含20%胎牛血清、100u/ml庆大霉素、25mMol/L HEPES的高糖型DMEM培养液重悬沉淀。
4.细胞培养
将所得的细胞悬液浓度调整至5～6×105/ml，置于培养瓶或预先置有盖破片的六孔培养板内37℃，5%CO2孵箱内培养。每24h更换培养液1次。(第一次换液时用培养液洗两次，以去除细胞碎片、内源激素;换液之前在倒置相差显微镜下检查细胞贴壁和细胞形态。)
细胞活力检测(台盼蓝排斥试验)
